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鱼蛋白胨细胞的冷冻保存方法

发布时间:2020-12-12 浏览次数:

鱼蛋白胨通常以深海鳕鱼为原料,经酶解法或微生物发酵法再经精滤、浓缩、喷雾干燥而成,生产的主要成分为小分子肽(胨氮含量高)及氨基氮的粉末状产品,其中小分子肽含量高于骨蛋白胨,易于微生物吸收,加快微生物的生长。

关于鱼蛋白胨细胞的冷冻保存方法如下:

1.传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成鱼蛋白胨细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

2.程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与之保存。

冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。

配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚砜至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。

离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。

取与鱼蛋白胨细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液,使细胞浓度为1~5×106cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2mlial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期,然后进行冻存。

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